Caracterização morfológica e imunoistoquímica de um modelo de pele humana reconstruída in vitro

Autores

  • Luís Ricardo Martinhão Souto Universidade Estadual de Campinas
  • José Vassallo Universidade Estadual de Campinas
  • Jussara Rehder Universidade Estadual de Campinas
  • Glauce Aparecida Pinto Universidade Estadual de Campinas
  • Maria Beatriz Puzzi Universidade Estadual de Campinas

Palavras-chave:

Queimaduras, Citoqueratina, Imunoistoquímica, Transplante de pele, Engenharia tissular

Resumo

CONTEXTO E OBJETIVO: Nos últimos anos, diferentes modelos de pele humana reconstruída in vitro (PHRIV) foram descritos para uso clínico e aplicações em pesquisa na indústria farmacêutica. Antes de serem liberados para uso rotineiro como substitutos de pele humana, os modelos de PHRIV necessitam de testes (estudos) comparativos com a pele humana in vivo, por meio de análises morfológica (arquitetural) e imunoistoquímica (funcional). O objetivo deste trabalho é estudar as características imunoistoquímicas de um modelo de PHRIV desenvolvido em nosso serviço, comparando-as com a pele humana, para que esse modelo de PHRIV possa vir a ser testado clinicamente em casos de queimaduras e ulcerações de pele nos quais métodos tradicionais de tratamento não estejam indicados. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo experimental laboratorial realizado no Laboratório de Cultura de Células da Pele da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas (FCM/Unicamp), Campinas, São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Cortes histológicos foram corados com hematoxilina-eosina, tricrômio de Masson para fibras colágenas, ácido periódico-reagente de Schiff para membrana basal e glicogênio, Weigert-Van Gieson para fibras elásticas e Fontana-Masson para melanócitos. Estudo imunoistoquímico foi realizado para identificar citoqueratinas de amplo espectro de pesos moleculares (AE1/AE3), citoqueratinas de alto peso molecular (34βE12), citoqueratinas de baixo peso molecular (35βH11), citoqueratinas 7 e 20, vimentina, proteína S-100 (para melanócitos e células dendríticas), CD68 (KP1, histiócitos) e CD34 (QBend, endotélio). RESULTADOS: A histologia revelou similaridade satisfatória entre PHRIV e a pele in vivo. O estudo imunoistoquímico da PHRIV demonstrou padrão semelhante de marcadores usualmente presentes na pele humana in vivo. CONCLUSÃO: A PHRIV estudada é morfológica e funcionalmente compatível com a pele humana observada in vivo.

Downloads

Não há dados estatísticos.

Biografia do Autor

Luís Ricardo Martinhão Souto, Universidade Estadual de Campinas

MD, MSc. Postgraduate (PhD) student of Surgery, School of Medical Sciences, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, São Paulo, Brazil.

José Vassallo, Universidade Estadual de Campinas

MD, PhD. Titular professor, Department of Pathological Anatomy, School of Medical Sciences, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, São Paulo, Brazil.

Jussara Rehder, Universidade Estadual de Campinas

BSc. Chief biologist, Laboratory of Molecular Biology and Skin Cell Culture, School of Medical Sciences, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, São Paulo, Brazil.

Glauce Aparecida Pinto, Universidade Estadual de Campinas

BSc, PhD. Biomedical researcher, Laboratory of Experimental Pathology, Women’s Full Healthcare Center, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, São Paulo, Brazil.

Maria Beatriz Puzzi, Universidade Estadual de Campinas

MD, PhD. Associate professor of Dermatology, Department of Internal Medicine. Head of the Skin Cell Culture Laboratory, School of Medical Sciences, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, São Paulo, Brazil.

Referências

Kim BM, Suzuki S, Nishimura Y, et al. Cellular artificial skin substitute produced by short period simultaneous culture of fibroblasts and keratinocytes. Br J Plast Surg. 1999;52(7):573-8.

Kremer M, Lang E, Berger AC. Evaluation of dermal-epidermal skin equivalents (‘composite- skin’) of human keratinocytes in a collagen-glycosaminoglycan matrix(Integra artificial skin). Br J Plast Surg. 2000;53(6):459-65.

Hoeller D, Huppertz B, Roos TC, et al. An improved and rapid method to reconstruct skin equivalents from human hair follicles and fibroblasts. Exp Dermatol. 2001;10(4):264-71.

Jansson K, Haegerstrand A, Kratz G. A biodegradable bovine collagen membrane as a der- mal template for human in vivo wound healing. Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg. 2001;35(4):369-75.

Navsaria HA, Ojeh NO, Moiemen N, Griffiths MA, Frame JD. Reepithelialization of a full- thickness burn from stem cells of hair follicles micrografted into a tissue-engineered dermal template (Integra). Plast Reconstr Surg. 2004;113(3):978-81.

Souto LR, Rehder J, Vassallo J, Cintra ML, Kraemer MH, Puzzi MB. Model for human skin reconstructed in vitro composed of associated dermis and epidermis. Sao Paulo Med J. 2006;124(2):71-6.

Ponec M. In vitro cultured human skin cells as alternatives to animals for skin irritancy screening. Int J Cosmet Sci. 1992;14(6):245-64. Available from: http://www3.interscience. wiley.com/cgi-bin/fulltext/119984942/PDFSTART. Accessed in 2008 (Dec 23).

Ponec M, Boelsma E, Gibbs S, Mommaas M. Characterization of reconstructed skin models. Skin Pharmacol Appl Skin Physiol. 2002;15(Suppl 1):4-17.

Mirastschijski U, Bugdahl R, Rollman O, Johansson BR, Agren MS. Epithelial regeneration from bioengineered skin explants in culture. Br J Dermatol. 2006;154(1):42-9.

Stock UA, Vacanti JP. Tissue engineering: current state and prospects. Annu Rev Med. 2001;52:443-51.

Ponec M, Gibbs S, Pilgram G, et al. Barrier function in reconstructed epidermis and its re- semblance to native human skin. Skin Pharmacol Appl Skin Physiol. 2001;14(Suppl 1):63- 71.

Régnier M, Asselineau D, Lenoir MC. Human epidermis reconstructed on dermal substrates in vitro: an alternative to animals in skin pharmacology. Skin Pharmacol. 1990;3(2):70- 85.

Helm KF. Immunohistochemistry of skin tumors. In: Dabbs D, editor. Diagnostic immunohis- tochemistry. 1st ed. Philadelphia: Churchill Livingstone; 2002. p.313-32.

Eichner R, Bonitz P, Sun TT. Classification of epidermal keratins according to their immuno- reactivity, isoelectric point, and mode of expression. J Cell Biol. 1984;98(4):1388-96.

Régnier M, Pruniéras M, Woodley D. Growth and differentiation of adult human epidermal cells on dermal substrates. Front Matrix Biol. 1981;9:4-35.

El Ghalbzouri A, Jonkman MF, Dijkman R, Ponec M. Basement membrane reconstruction in human skin equivalents is regulated by fibroblasts and/or exogenously activated kerati- nocytes. J Invest Dermatol. 2005;124(1):79-86.

Dean NR, Brennan J, Haynes J, Goddard C, Cooter RD. Immunohistochemical labeling of normal melanocytes. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2002;10(3):199-204.

Bessou S, Pain C, Taïeb A. Use of human skin reconstructs in the study of pigment modifiers. Arch Dermatol. 1997;133(3):331-6.

Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology. 2002;40(5):403-39.

Bhawan J, Whren K, Panova I, Yaar M. Keratin 16 expression in epidermal melanocytes of normal human skin. Am J Dermatopathol. 2005;27(6):476-81.

Dale BA, Holbrook KA. Developmental expression of human epidermal keratins and filaggrin. Curr Top Dev Biol. 1987;22:127-51.

Poniecka AW, Alexis JB. An immunohistochemical study of basal cell carcinoma and tricho- epithelioma. Am J Dermatopathol. 1999;21(4):332-6.

Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31(1): 11-24.

Böni R, Burg G, Doguoglu A, et al. Immunohistochemical localization of the Ca2+ binding S100 proteins in normal human skin and melanocytic lesions. Br J Dermatol. 1997;137(1):39-43.

Smith ME, Costa MJ, Weiss SW. Evaluation of CD68 and other histiocytic antigens in angio- matoid malignant fibrous histiocytoma. Am J Surg Pathol. 1991;15(8):757-63.

Nickoloff BJ. The human progenitor cell antigen (CD34) is localized on endothelial cells, der- mal dendritic cells, and perifollicular cells in formalin-fixed normal skin, and on proliferating endothelial cells and stromal spindle-shaped cells in Kaposi’s sarcoma. Arch Dermatol. 1991;127(4):523-9.

Downloads

Publicado

2009-01-01

Como Citar

1.
Souto LRM, Vassallo J, Rehder J, Pinto GA, Puzzi MB. Caracterização morfológica e imunoistoquímica de um modelo de pele humana reconstruída in vitro. Sao Paulo Med J [Internet]. 1º de janeiro de 2009 [citado 12º de março de 2025];127(1):28-33. Disponível em: https://periodicosapm.emnuvens.com.br/spmj/article/view/1847

Edição

Seção

Artigo Original